HPLC色譜概述 液相色譜法(HPLC)是上個世紀七十年代迅速發展起來的一項快速的分析分離技術,是現代分離測試的重要手段。
色譜法的分離原理是:溶于流動相(mobile phase)中的各組分經過固定相時,由于與固定相(station phase)發生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強弱不同,在固定相中滯留時間不同,從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。
HPLC是在經典的液相色譜法基礎上發展起來的,其以液體作為流動相,并采用顆粒極細的固定相的柱色譜分離技術。其分離機制與常規柱色譜相同,但填料更加精細,需高壓泵推動,柱效高,分析速度快。
與氣相色譜不同的是液相色譜中流動相亦參與組分的分離過程,其組成、比例和pH值可靈活調節,分離模式多樣。在實際操作中主要通過改變流動相的組成來調節樣品在色譜柱的保留值和選擇性,從而使不同樣品得到分離。
液相色譜法的應用范圍十分廣泛,對樣品的適用性廣,不受分析對象揮發性和熱穩定性的限制,幾乎所有的化合物包括高沸點、極性、離子型化合物和大分子物質均可用液相色譜法分析測定,因而彌補了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機化合物中,可用氣相色譜分析的約占20%,而80%則需用液相色譜來分析。
液相色譜基線漂移的原因
(1)柱的溫度波動。即使是微小的溫度變化也會導致基線波動。通常影響差異檢測器、電導檢測器、UV檢測器或其它光電類檢測器的較低靈敏度。
(2)色譜流動相不均勻流動相條件變化,引起的基線漂移大于溫度變化引起的基線漂移。
(3)污染或氣體循環池。
(4)探測器出口堵塞。(高壓導致循環水池窗口的爆裂,產生噪聲基線)。
(5)不正確的流量比或流量變化。
(6)柱的平衡是緩慢的,特別是當移動相發生變化時。
(7)由低質量的溶劑污染、變質或制備。
(8)個樣品具有較強的保留力(高K‘值)至汕頭峰。