中壓制備色譜是一種廣泛應用于藥物、化學、食品等領域的分離純化技術。其作用是對復雜混合物進行分離純化,從中得到目標化合物。
中壓制備色譜可用于分離純化天然產物、合成物或混合物。其作用是將復雜的混合物分離成單一化合物或純化化合物。與其他分離方法相比,中壓制備色譜具有分離效率高、選擇性好、操作簡單等特點,因此被廣泛應用于藥物、化學、食品等領域。
分離原理是根據化合物在不同穩定相(固體或液體)中的分配行為,通過它們與固定在柱上的特定填料的相互作用來實現。填料具有不同的親和性,可以選擇性地吸附或排除不同化合物,以實現分離和純化目的。常用的填料有硅膠、OCTADECYL硅膠、石墨碳和氮化硅(C18)等。
中壓制備色譜的操作方法:
1.前處理
樣品準備:為了得到準確的色譜分析結果,樣品必須具有高度純度。混合物可以通過提取、分離和純化等方法進行前處理。
溶劑選擇:在進行色譜分析之前,必須選擇合適的流動相。通常用于中壓制備色譜中的流動相是有機溶劑(如甲醇、乙醇、醚等)和水的混合物。
2.柱選擇與填料選擇
柱選擇:柱是中壓制備色譜的核心部分。對于中壓制備色譜,通常選擇內徑較大的柱(10-50mm)。
填料選擇:常用的填料有硅膠、OCTADECYL硅膠、石墨碳和C18等。選擇填料應根據化合物的極性和化學性質進行。
3.裝柱和校準
裝柱:將選好的填料放入柱中,使之均勻分布。
校準:根據樣品性質選擇合適的流動相和溫度等條件,確定最佳分離條件。
4.色譜分離實驗
將樣品溶液加入柱中,通過未固定的化學互作用,使其分離成單一或純凈化合物。同時,記錄樣品進入柱和流經柱的時間,并根據判斷溶液進出時間的間隔來評估分離效果。