高效液相色譜從原理上與經典的液相色譜沒有本質的差別,它的特點是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相,適于分析高沸點不易揮發、分子量大、不同極性的有機化合物。
使用高效液相色譜時,液體待檢測物被注入色譜柱,通過壓力在固定相中移動,由于被測物種不同物質與固定相的相互作用不同,不同的物質順序離開色譜柱,通過檢測器得到不同的峰信號,最后通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質。高效液相色譜作為一種重要的分析方法,廣泛地應用于化學和生化分析中。
高效液相色譜跑梯度如何平衡基線?
首先,當梯度完成時,基線漂移是正常的,但是基線漂移的嚴重性可以通過以下措施來改善:
1.梯度前,最好用純有機溶劑沖洗高效液相色譜柱,或使用新高效液相色譜柱,以防止高效液相色譜柱中的殘留物導致基線漂移。
2.試劑純度優選為普通色譜純試劑。如果純度不夠,梯度過程中也會出現基線漂移。
3.控制室或柱溫,防止溫度波動
4.注射前,進行溶劑空白試驗。如果基線漂移嚴重,可使用該空白進行扣除,基線漂移將得到改善。